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隨著煙葉生產(chǎn)中感病特色品種的持續(xù)種植，原有抗病品種抗性喪失，加之煙苗移栽苗齡小、抗病性弱，煙草黑脛病在局部地區(qū)嚴(yán)重發(fā)生，但其田間診斷技術(shù)難以適應(yīng)防控需求。本文辨析了煙草黑脛病、根黑腐病和青枯病的區(qū)別，提出了還苗期伸根期黑脛病與青枯病的診斷和處置方法，分析了整株系統(tǒng)性葉片局部枯斑枯焦的病因以及“黑桿”病癥剖析等實(shí)例，提出田間癥狀識(shí)別等傳統(tǒng)診斷技術(shù)與免疫學(xué)診斷技術(shù)、分子生物學(xué)診斷技術(shù)等專項(xiàng)檢測(cè)相結(jié)合，比對(duì)與排除獲得診斷結(jié)論是煙草黑脛病診斷的關(guān)鍵技術(shù)與方法。

關(guān)鍵詞：煙草黑脛病；根黑腐病；青枯病；診斷

煙草黑脛病（tobaccoblackshank）是由煙草疫霉（Phytophthoranicotianae）引起的，主要侵染煙草的根和莖基部，也可侵染葉片和幼苗，是煙草病害中僅次于病毒病的第二大類病害。煙草感染黑脛病后，往往會(huì)整株凋萎、死亡，對(duì)煙葉生產(chǎn)具毀滅性。盡管一些中抗品種的大面積推廣對(duì)抑制黑脛病發(fā)揮了重要作用，但部分煙草種植區(qū)持續(xù)種植感病的特色品種，原有抗病品種抗性逐漸喪失，加之煙苗移栽苗齡小、抗病性弱，導(dǎo)致黑脛病在局部暴發(fā)為害，對(duì)煙草生產(chǎn)造成嚴(yán)重威脅。病害的準(zhǔn)確診斷是實(shí)施有效防控的先決條件，為此，筆者結(jié)合多年田間實(shí)踐經(jīng)歷和病害診斷經(jīng)驗(yàn)，針對(duì)煙草黑脛病診斷中值得商榷的幾個(gè)問(wèn)題提出思考與建議。

1煙草黑脛病重發(fā)的原因

1）感病特色品種的持續(xù)種植。近年來(lái)，煙草品種特色化要求維持、加大一些地方特色品種的種植，而部分地方特色品種如云南的紅花大金元、福建的翠碧一號(hào)均為感黑脛病的品種。特色感病品種的大面積種植，累積加大了土壤煙草疫霉病原的基數(shù)，煙草黑脛病發(fā)病早、蔓延快、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)、為害嚴(yán)重、覆蓋范圍廣。2）原有抗病品種抗性喪失。隨著現(xiàn)代農(nóng)業(yè)栽培技術(shù)的發(fā)展，一些經(jīng)濟(jì)作物如花卉、蔬菜、水果的種植面積逐年增加，煙草作為比較經(jīng)濟(jì)效益低下的作物漸漸向丘陵與山區(qū)集中，有限的耕地制約了煙草的輪作與休耕，連作導(dǎo)致了廣泛種植的中抗品種（如云煙87）慢慢變?yōu)槟筒　⒏胁　?）煙苗移栽的苗齡小，抗病性弱。應(yīng)用膜下小苗或膜下“井窖式”小苗等技術(shù)，35～45d苗齡的移栽煙苗在膜下生長(zhǎng)。由于膜下土壤溫度提高，田間小環(huán)境濕度增大，導(dǎo)致煙株發(fā)病提前、發(fā)病快。4）田間病害診斷困難，延誤防治時(shí)期。煙草病害癥狀具有復(fù)雜性，一方面同一種病害表現(xiàn)出多種癥狀，如煙草黑脛病可以表現(xiàn)為根莖部黑脛、地上部莖葉“穿大褂”“腰爛”，葉部“黑膏藥”；另一方面多病原可以引起相同癥狀，如煙草莖“黑桿”癥狀。此外，煙草黑脛病典型癥狀出現(xiàn)存在明顯的滯后性，典型癥狀出現(xiàn)時(shí)已經(jīng)進(jìn)入病害的晚期，只能采取拔除煙株、藥劑消毒病灶、改種其他可以防病的作物等措施，以阻止病害的蔓延，但對(duì)煙草造成的損失已無(wú)可挽回。

2煙草黑脛病診斷中的問(wèn)題及其解決辦法

2.1明確區(qū)分煙草黑脛病、根黑腐病和青枯病

煙草“兩黑病”是煙草黑脛病、根黑腐病（Tobaccoblackrootrot）的一種籠統(tǒng)說(shuō)法，有時(shí)候還把青枯病引起的莖稈變黑混到了一起，這是對(duì)病害診斷和防治很不確切的提法。煙草黑脛病、根黑腐病和青枯病的病原有很大的區(qū)別。煙草黑脛病是煙草疫霉引起的，屬于卵菌病害；根黑腐病是由基生根串珠霉（Thielavioisbasicola）引起的，屬于真菌病害；而青枯病則是由青枯雷爾氏菌（Ralstoniasolanacea-rum）引起的，屬于細(xì)菌病害。筆者在多年的云南煙區(qū)田間病害調(diào)查中，極少發(fā)現(xiàn)煙草根黑腐病，這點(diǎn)也被2010—2014年開(kāi)展的煙草有害生物調(diào)查證實(shí)，即使在種植感病品種紅花大金元的區(qū)域進(jìn)行的聯(lián)合調(diào)查也極難發(fā)現(xiàn)煙草根黑腐病。也就是說(shuō)，煙草根黑腐病是偶發(fā)的次要病害，在田間零星發(fā)生，偶爾有成行的幾株呈現(xiàn)出發(fā)病中心的態(tài)勢(shì)，其為害可以忽略不計(jì)。煙草黑脛病則不同，在田間常年維持在1%左右的發(fā)病率，大面積踏查時(shí)，黑脛病引起的凋萎癥狀很易發(fā)現(xiàn)。總的來(lái)說(shuō)，通常所說(shuō)的“兩黑病”少90%以上的概率是發(fā)生了黑脛病。此外，要將近年來(lái)越來(lái)越嚴(yán)重的青枯病導(dǎo)致的莖稈發(fā)黑的現(xiàn)象，和黑脛病進(jìn)行區(qū)分。以上3種病害，在實(shí)驗(yàn)室可用特異性引物進(jìn)行單個(gè)或多重PCR擴(kuò)增檢測(cè)進(jìn)行區(qū)分，在田間調(diào)查中，可以根據(jù)侵染時(shí)期、為害特點(diǎn)和病征進(jìn)行區(qū)分。①侵染時(shí)期。煙草黑脛病在煙草整個(gè)生育期均可發(fā)生，在團(tuán)棵期和旺長(zhǎng)期有兩個(gè)明顯的發(fā)病高峰期。通常發(fā)生面廣，隨著時(shí)間推移，病害擴(kuò)散較快，能形成明顯的發(fā)病中心。煙草根黑腐病主要在苗床期、大田前期發(fā)生，多為局部或零星發(fā)病。煙草青枯病在整個(gè)大田期均可發(fā)生，病菌侵染集中在伸根期、中耕培土?xí)r，病害發(fā)展相對(duì)緩慢，發(fā)病高峰期表現(xiàn)在旺長(zhǎng)期、成熟期和采烤后，病害在田間呈條帶或條塊狀分布，且發(fā)生更為普遍、嚴(yán)重。②為害特點(diǎn)。煙草黑脛病主要通過(guò)根莖部侵染，病狀主要表現(xiàn)為根莖部變黑，縱向剖開(kāi)后可見(jiàn)莖髓部褐*片；在苗期或漂浮盤上的幼苗受黑脛病侵染會(huì)在3～5d的短期引起“猝倒”死亡的嚴(yán)重癥狀，而煙苗移栽大田成活后，若根部受到侵染，遇到連續(xù)干旱病害發(fā)展比較緩慢，少在20d后才可能在地上部表現(xiàn)凋萎、葉枯等明顯的癥狀，遇到雨季，約7d就可在地上部表現(xiàn)明顯的癥狀。煙草根黑腐病主要侵染根部，病狀表現(xiàn)為根腐爛變褐、變黑，有時(shí)會(huì)蔓延根莖部，縱向剖開(kāi)無(wú)褐*片，一般發(fā)病煙株矮化、輕度萎蔫，不會(huì)死亡。煙草青枯病主要通過(guò)根侵染，特別是新生側(cè)根、須根、不定根更容易受到侵染，病狀先表現(xiàn)在根上，當(dāng)根部受到侵染后，地上部分幾片葉萎蔫下垂，但葉片不變色，橫切病葉主脈，可發(fā)現(xiàn)呈黃褐色黑褐色的環(huán)狀維管束，挖出完整的根系，把泥土沖洗干凈，可發(fā)現(xiàn)少數(shù)根病變?yōu)楹稚⒑谏恢泻笃谇o上病斑沿莖的一側(cè)向上擴(kuò)展，在莖上形成條斑，病斑一側(cè)的葉片萎蔫，半邊枯萎，俗稱“半邊瘋”，縱剖病莖，髓部不變色、外圍呈蜂窩狀軟腐。發(fā)生根黑腐病、青枯病的煙株根部必然腐爛病變，發(fā)生根黑腐病的煙株整株根系少、在莖基部的四周產(chǎn)生數(shù)量較多的不定根，發(fā)生青枯病的煙株根系較完整、在根發(fā)病的一側(cè)產(chǎn)生較多的不定根，但發(fā)生黑脛病的根不一定腐爛。③病征。取新鮮的病組織進(jìn)行保濕培養(yǎng)，產(chǎn)生白色稀疏菌絲的為煙草疫霉，產(chǎn)生灰色或淺黑色菌絲的為基生根串珠霉，產(chǎn)生黃白色菌膿的為青枯雷爾氏菌。

2.2還苗期伸根期黑脛病、青枯病的診斷和處置方法

不同的病原均會(huì)造成煙草幼苗根莖腐爛、整株死亡，而煙農(nóng)對(duì)于膜下小苗的感病癥狀普遍存在認(rèn)識(shí)誤區(qū)和診斷困難，建議從以下幾方面進(jìn)行排查和辨析。采用膜下小苗或膜下“井窖式”小苗移栽技術(shù)，發(fā)生病害的死苗率往往大于常規(guī)移栽的死苗率。在還苗期伸根期，幼苗與土壤表層接觸的莖基部出現(xiàn)暗褐色黑色病斑，病斑再擴(kuò)展環(huán)繞幼莖或底葉受到侵染沿葉柄擴(kuò)展到莖上，引起“猝倒”癥狀，黑脛病、青枯病侵染的概率比較大。由于癥狀不典型，采用傳統(tǒng)病害診斷難下結(jié)論，而移栽季節(jié)的限制又必需及時(shí)作出診斷結(jié)論，建議使用疫霉鞭毛、青枯菌一步法免疫膠體金快速診斷試劑盒，在田間地頭或檢查現(xiàn)場(chǎng)直接確診，以便采取相應(yīng)的預(yù)防補(bǔ)救措施。如果發(fā)病率不超過(guò)10%，不論是煙草黑脛病、還是青枯病，均需要在病株周圍土壤撒生石灰拌土，然后進(jìn)行補(bǔ)栽，在補(bǔ)栽當(dāng)日、補(bǔ)栽后10d、20d進(jìn)行化學(xué)防治；如果發(fā)病率超過(guò)10%，感染黑脛病的建議換栽抗性更強(qiáng)的品種，感染青枯病的建議改種其他作物，水旱輪作或與禾本科作物實(shí)行3年輪作后才可再次種植煙草。

2.3注意區(qū)分持續(xù)干旱與黑脛病造成的整株系統(tǒng)性凋萎

在云南煙區(qū)，煙草團(tuán)棵期往往遇上連續(xù)的干旱時(shí)期，導(dǎo)致煙株葉片系統(tǒng)性萎焉，形成日灼斑，即局部枯斑、枯焦；而煙草前期感染黑脛病后，也會(huì)整株系統(tǒng)性地表現(xiàn)葉片凋萎，形成局部枯斑、枯焦癥狀。這通常會(huì)引起煙農(nóng)的恐慌。持續(xù)干旱與黑脛病引起的系統(tǒng)性凋萎，可采用侵染性病害與非侵染性病害傳統(tǒng)診斷方法或補(bǔ)水治療診斷進(jìn)行區(qū)分。如果該癥狀在田間大面積同時(shí)發(fā)生、分布較均勻，且多在頂部心葉的外圍葉片和中、上部葉片的葉尖葉邊部分出現(xiàn)癥狀的，則是干旱造成的；在田間有明顯的發(fā)病中心、零散不均勻分布，中下部葉葉尖葉邊部分出現(xiàn)癥狀的，則是黑脛病。連續(xù)補(bǔ)水3～5d，萎蔫癥狀消失的，則是干旱造成的，萎蔫癥狀持續(xù)加重的，則是黑脛病。診斷為黑脛病的，在雨季來(lái)臨前，進(jìn)行化學(xué)藥劑防治，可以阻止病害的進(jìn)一步發(fā)展。診斷為干旱病因的，能灌溉的要及時(shí)補(bǔ)水，無(wú)灌溉條件的就等待雨季的來(lái)臨。

2.4切勿將“黑桿”癥狀稱為“黑桿病”

“黑桿病”是煙草感病后出現(xiàn)莖稈變黑癥狀的一個(gè)通俗說(shuō)法，但從技術(shù)角度分析則大為不妥，有失嚴(yán)謹(jǐn)。引起煙草黑桿癥狀的病害種類較多，煙草黑脛病、青枯病、空莖病（Tobaccohollowstalk）、馬鈴薯Y病毒病（PotatovirusY）、斑萎病（Tobaccospottedwilt）等均會(huì)導(dǎo)致煙莖變黑。如果是煙株葉片采烤完畢、僅剩煙稈，憑莖變黑的癥狀難以進(jìn)行病害診斷，此時(shí)應(yīng)當(dāng)通過(guò)現(xiàn)場(chǎng)踏查，進(jìn)行癥狀識(shí)別。一般來(lái)說(shuō)，田間零星發(fā)生的，縱剖病莖，髓部空心的是煙草空莖病；田間病害沿行向發(fā)展的，莖上病斑形成黑色條斑，縱剖病莖，髓部呈蜂窩狀軟腐、無(wú)碟片、可擠出菌膿，橫切病莖病側(cè)維管束呈黃褐色或黑褐色的是煙草青枯病；田間病害以同心圓發(fā)展的、莖上有圓形病斑的是煙草斑萎病；莖上有凹陷黑色塊狀病斑的是煙草馬鈴薯Y病毒病。此外，若病莖腐爛程度較重，可輔以一步法免疫膠體金快速診斷試劑盒進(jìn)行準(zhǔn)確診斷，或在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病原特異性PCR擴(kuò)增檢測(cè)。綜上所述，基層技術(shù)人員和煙農(nóng)在診斷煙草黑脛病時(shí)，應(yīng)注意與其他癥狀易混淆的侵染性病害或非侵染性病害進(jìn)行區(qū)別，養(yǎng)成在病害侵染前期系統(tǒng)觀察病癥的習(xí)慣，慎用“兩黑病”、“黑桿病”等模棱兩可的非專業(yè)術(shù)語(yǔ)。對(duì)于黑脛病及其近似病害的準(zhǔn)確診斷，仍有賴于DNA分子檢測(cè)或快速檢測(cè)試劑盒，但是，生產(chǎn)一線缺乏實(shí)驗(yàn)室設(shè)備，而一步法免疫膠體金快速診斷試劑盒目前主要靠進(jìn)口，其使用成本較高，大面積推廣應(yīng)用還不現(xiàn)實(shí)。建議進(jìn)一步研發(fā)廉價(jià)實(shí)用的國(guó)產(chǎn)化快速檢測(cè)試劑盒，或者是基于感病組織膜電位變化特征的田間植物病害診斷儀、便攜式DNA提取與PCR擴(kuò)增檢測(cè)一體儀，也可以應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)遠(yuǎn)程診斷等方式，幫助田間快速診斷。

GHU9_20//3G39//02500//G3RU0D4** 
GHU9_20//5G29//01024//GPR030 
GHU9_20//5GT9//01024//G3R020//U0D4** 
GHU9_25//5G59//01024//G3R020//U0*** 
GHU9_30/%G59//02048//G3R020// 
GHU9_30//5G29//00900//G6R 
GHU9_30//5G59//00900//G6R// 
GHU9_30//5G59//05000//G6R// 
GHU9_30//5GT9//01024//G3R020// 
GHU9-20/3G3-9/600/G6R 
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GHU920393R/2000 
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GHU920596R/600 
GHU9-30//5G59//5000//G6R 
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GXU9_20//5G29//1024//GPR030 
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H25D-SS-12GC-7272-CCW-SM14/19-S4 
H25E-F1-SS-1024-ABZC-8830-IED-SM12 
H25E-F45-SB-2048-ABZC-4469-SM18-S 
H2OE-62HBS-F28-SS-1024-ABZC-SC 
H40A-50-ABZC-4468-SC  
H40B-CCW-5GC-7406-LED-SC-UL VDCIN5V  
HS25F-62-R2-SS-1024-ABC-7272-SCS18 
HS35F-100-R2-SS-1024-ABC-7272-SM16 
HS35F-100-SS-1024-ABZC-28V/5-SM18-S 
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IN58LER005/1024 
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M9445/015 
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NEG0001951 
PA 02 599/30 
PHM510//PSSG//12B12D4//S6R//**03** 
PHU9_16//PSSG//13B12D5//S5R020//U0*** 
PHU9_20//PSSG//12B12D4//S6R//U1**** 
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PL22/956RS/1050 
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SHM9_12//592G//07B08//S9R020 
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SHM9_12//5X6G//13B12//X3R020 
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SHM9122423R/1024/512 
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SHU9_25//5BGB//13B16//B4R010/05/S1*** 
SHU9_30//5BG0//13B16//B4R050// 
SHU9_30//5SPG//13B12D5//S6R// 
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SHU925//5BGB//13B16//B4R010/S1 
SHU925/5SSG/13/B12 S6R 
SHU9-30//5BGB//13B16//B4R050 
SHU930/5SSG/13B12D5/S6R 
SM18-S  MOTOR ENCODER 
BEI Ideacod  SN506015144AE 
SXM9_12//5SIB//13B12D5//S7R050 
YXM9122403R/30/16/2048 
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AINH90-20-2-P-3R-9000 
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DHM 506-2500-025 
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SHU930-1316-002 
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DHM510-0100-001 
MT40A-X-L128G-64T-GD15-CR-S-SG1-ST-24 
MT40A-X-L128G-64T-GD15-CR-S-SG-1-ST-24 
SHM5-10-5BGB-13B16 
CHM510-10BT-005 
HMT25D-SS-12X8GC-S3-CW-SM18  
DHM510D8000-007  
MHK616-DNET-001 
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GHA506-0030S001/6871 
IN58 LER 001/1024 
IN58LER 004/1024 
GHT512 293R/2048 
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 FEM 5CTS A SOUND T3361001 
AMH9 30 5 CP G 13 C6R 
9416/076 CONNECTOR 
GHL 920-393R-200 
GHU 920-396R 
GHT 912396R/1024 
DHO514 PG59 01024 G3R010        
DHO5 14 R G2 9 1024 G3R 
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HS35F-62-R6-BS-2048-ABZC-28V/V-SM18-S 
9445/004 
HS35F-62-R14-SS-1024-ABZC-4469 
GH05 10593R 200"BEI Ideacod Encoder" 9416076 
924-01002-7**9     
AHM51024C3R/1024 
AK510 5 9 6R/1024 
AK514296R/60 
AK514573R/100 
AMH920/5SSB/13/B12/S7R 24VDC WITH bush 
B6589 
CBM9_12//5CNG//12//C3R020 (NEW NAME ) 
BEI Ideacod Encoder CD60MEC 
CHM5_06//5C5G//12//CPR//**03** 
CHM5_10//PC5G//13//C3R020 
CHM5065426R/4096 
CHM5105426R/8192 
CHM9-12-5A2B/1O/A6R 
CHU9-15//5CNB//13//C3R 
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CHU9-30//5CPG//13/C6R 
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DAC9445/009 2 Points Pour HUB / -HT9 
DH05_14//2G29//06000//GDR**DS** 
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DHM5_10/PG59/01024/G3R020 
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DHM5-10/5GT9/01024/G3R020 
DHM5S06//2G29//01000//0ORO10//**0360 
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DHM9_12//RG59//05000//G3A030+12 pole 
DHM9-11/5G5/9/0180/G3A030 
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BEI Ideacod Encoder DHT514-RG2P/1024/G3R 
DXM9_12//RG59//05000//G3A030+12-polePLug9416/013 
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FINH5810A593R/1024 
GAMX_12//5G59//00256//GPA030// 
GAUX30//5G59//01024//GPR030 
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BEI Ideacod Encoder GHK510293R/1024 
GHM_10//5G59//00600//G6R020 
GHM5 10 576R / 100 
GHM5_10//2G29//00800//G6R  
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GHM510576R / 100 
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隨著煙葉生產(chǎn)中感病特色品種的持續(xù)種植，原有抗病品種抗性喪失，加之煙苗移栽苗齡小、抗病性弱，煙草黑脛病在局部地區(qū)嚴(yán)重發(fā)生，但其田間診斷技術(shù)難以適應(yīng)防控需求。本文辨析了煙草黑脛病、根黑腐病和青枯病的區(qū)別，提出了還苗期伸根期黑脛病與青枯病的診斷和處置方法，分析了整株系統(tǒng)性葉片局部枯斑枯焦的病因以及“黑桿”病癥剖析等實(shí)例，提出田間癥狀識(shí)別等傳統(tǒng)診斷技術(shù)與免疫學(xué)診斷技術(shù)、分子生物學(xué)診斷技術(shù)等專項(xiàng)檢測(cè)相結(jié)合，比對(duì)與排除獲得診斷結(jié)論是煙草黑脛病診斷的關(guān)鍵技術(shù)與方法。

關(guān)鍵詞：煙草黑脛病；根黑腐病；青枯病；診斷

煙草黑脛病（tobaccoblackshank）是由煙草疫霉（Phytophthoranicotianae）引起的，主要侵染煙草的根和莖基部，也可侵染葉片和幼苗，是煙草病害中僅次于病毒病的第二大類病害。煙草感染黑脛病后，往往會(huì)整株凋萎、死亡，對(duì)煙葉生產(chǎn)具毀滅性。盡管一些中抗品種的大面積推廣對(duì)抑制黑脛病發(fā)揮了重要作用，但部分煙草種植區(qū)持續(xù)種植感病的特色品種，原有抗病品種抗性逐漸喪失，加之煙苗移栽苗齡小、抗病性弱，導(dǎo)致黑脛病在局部暴發(fā)為害，對(duì)煙草生產(chǎn)造成嚴(yán)重威脅。病害的準(zhǔn)確診斷是實(shí)施有效防控的先決條件，為此，筆者結(jié)合多年田間實(shí)踐經(jīng)歷和病害診斷經(jīng)驗(yàn)，針對(duì)煙草黑脛病診斷中值得商榷的幾個(gè)問(wèn)題提出思考與建議。

1煙草黑脛病重發(fā)的原因

1）感病特色品種的持續(xù)種植。近年來(lái)，煙草品種特色化要求維持、加大一些地方特色品種的種植，而部分地方特色品種如云南的紅花大金元、福建的翠碧一號(hào)均為感黑脛病的品種。特色感病品種的大面積種植，累積加大了土壤煙草疫霉病原的基數(shù)，煙草黑脛病發(fā)病早、蔓延快、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)、為害嚴(yán)重、覆蓋范圍廣。2）原有抗病品種抗性喪失。隨著現(xiàn)代農(nóng)業(yè)栽培技術(shù)的發(fā)展，一些經(jīng)濟(jì)作物如花卉、蔬菜、水果的種植面積逐年增加，煙草作為比較經(jīng)濟(jì)效益低下的作物漸漸向丘陵與山區(qū)集中，有限的耕地制約了煙草的輪作與休耕，連作導(dǎo)致了廣泛種植的中抗品種（如云煙87）慢慢變?yōu)槟筒　⒏胁　?）煙苗移栽的苗齡小，抗病性弱。應(yīng)用膜下小苗或膜下“井窖式”小苗等技術(shù)，35～45d苗齡的移栽煙苗在膜下生長(zhǎng)。由于膜下土壤溫度提高，田間小環(huán)境濕度增大，導(dǎo)致煙株發(fā)病提前、發(fā)病快。4）田間病害診斷困難，延誤防治時(shí)期。煙草病害癥狀具有復(fù)雜性，一方面同一種病害表現(xiàn)出多種癥狀，如煙草黑脛病可以表現(xiàn)為根莖部黑脛、地上部莖葉“穿大褂”“腰爛”，葉部“黑膏藥”；另一方面多病原可以引起相同癥狀，如煙草莖“黑桿”癥狀。此外，煙草黑脛病典型癥狀出現(xiàn)存在明顯的滯后性，典型癥狀出現(xiàn)時(shí)已經(jīng)進(jìn)入病害的晚期，只能采取拔除煙株、藥劑消毒病灶、改種其他可以防病的作物等措施，以阻止病害的蔓延，但對(duì)煙草造成的損失已無(wú)可挽回。

2煙草黑脛病診斷中的問(wèn)題及其解決辦法

2.1明確區(qū)分煙草黑脛病、根黑腐病和青枯病

煙草“兩黑病”是煙草黑脛病、根黑腐病（Tobaccoblackrootrot）的一種籠統(tǒng)說(shuō)法，有時(shí)候還把青枯病引起的莖稈變黑混到了一起，這是對(duì)病害診斷和防治很不確切的提法。煙草黑脛病、根黑腐病和青枯病的病原有很大的區(qū)別。煙草黑脛病是煙草疫霉引起的，屬于卵菌病害；根黑腐病是由基生根串珠霉（Thielavioisbasicola）引起的，屬于真菌病害；而青枯病則是由青枯雷爾氏菌（Ralstoniasolanacea-rum）引起的，屬于細(xì)菌病害。筆者在多年的云南煙區(qū)田間病害調(diào)查中，極少發(fā)現(xiàn)煙草根黑腐病，這點(diǎn)也被2010—2014年開(kāi)展的煙草有害生物調(diào)查證實(shí)，即使在種植感病品種紅花大金元的區(qū)域進(jìn)行的聯(lián)合調(diào)查也極難發(fā)現(xiàn)煙草根黑腐病。也就是說(shuō)，煙草根黑腐病是偶發(fā)的次要病害，在田間零星發(fā)生，偶爾有成行的幾株呈現(xiàn)出發(fā)病中心的態(tài)勢(shì)，其為害可以忽略不計(jì)。煙草黑脛病則不同，在田間常年維持在1%左右的發(fā)病率，大面積踏查時(shí)，黑脛病引起的凋萎癥狀很易發(fā)現(xiàn)。總的來(lái)說(shuō)，通常所說(shuō)的“兩黑病”少90%以上的概率是發(fā)生了黑脛病。此外，要將近年來(lái)越來(lái)越嚴(yán)重的青枯病導(dǎo)致的莖稈發(fā)黑的現(xiàn)象，和黑脛病進(jìn)行區(qū)分。以上3種病害，在實(shí)驗(yàn)室可用特異性引物進(jìn)行單個(gè)或多重PCR擴(kuò)增檢測(cè)進(jìn)行區(qū)分，在田間調(diào)查中，可以根據(jù)侵染時(shí)期、為害特點(diǎn)和病征進(jìn)行區(qū)分。①侵染時(shí)期。煙草黑脛病在煙草整個(gè)生育期均可發(fā)生，在團(tuán)棵期和旺長(zhǎng)期有兩個(gè)明顯的發(fā)病高峰期。通常發(fā)生面廣，隨著時(shí)間推移，病害擴(kuò)散較快，能形成明顯的發(fā)病中心。煙草根黑腐病主要在苗床期、大田前期發(fā)生，多為局部或零星發(fā)病。煙草青枯病在整個(gè)大田期均可發(fā)生，病菌侵染集中在伸根期、中耕培土?xí)r，病害發(fā)展相對(duì)緩慢，發(fā)病高峰期表現(xiàn)在旺長(zhǎng)期、成熟期和采烤后，病害在田間呈條帶或條塊狀分布，且發(fā)生更為普遍、嚴(yán)重。②為害特點(diǎn)。煙草黑脛病主要通過(guò)根莖部侵染，病狀主要表現(xiàn)為根莖部變黑，縱向剖開(kāi)后可見(jiàn)莖髓部褐*片；在苗期或漂浮盤上的幼苗受黑脛病侵染會(huì)在3～5d的短期引起“猝倒”死亡的嚴(yán)重癥狀，而煙苗移栽大田成活后，若根部受到侵染，遇到連續(xù)干旱病害發(fā)展比較緩慢，少在20d后才可能在地上部表現(xiàn)凋萎、葉枯等明顯的癥狀，遇到雨季，約7d就可在地上部表現(xiàn)明顯的癥狀。煙草根黑腐病主要侵染根部，病狀表現(xiàn)為根腐爛變褐、變黑，有時(shí)會(huì)蔓延根莖部，縱向剖開(kāi)無(wú)褐*片，一般發(fā)病煙株矮化、輕度萎蔫，不會(huì)死亡。煙草青枯病主要通過(guò)根侵染，特別是新生側(cè)根、須根、不定根更容易受到侵染，病狀先表現(xiàn)在根上，當(dāng)根部受到侵染后，地上部分幾片葉萎蔫下垂，但葉片不變色，橫切病葉主脈，可發(fā)現(xiàn)呈黃褐色黑褐色的環(huán)狀維管束，挖出完整的根系，把泥土沖洗干凈，可發(fā)現(xiàn)少數(shù)根病變?yōu)楹稚⒑谏恢泻笃谇o上病斑沿莖的一側(cè)向上擴(kuò)展，在莖上形成條斑，病斑一側(cè)的葉片萎蔫，半邊枯萎，俗稱“半邊瘋”，縱剖病莖，髓部不變色、外圍呈蜂窩狀軟腐。發(fā)生根黑腐病、青枯病的煙株根部必然腐爛病變，發(fā)生根黑腐病的煙株整株根系少、在莖基部的四周產(chǎn)生數(shù)量較多的不定根，發(fā)生青枯病的煙株根系較完整、在根發(fā)病的一側(cè)產(chǎn)生較多的不定根，但發(fā)生黑脛病的根不一定腐爛。③病征。取新鮮的病組織進(jìn)行保濕培養(yǎng)，產(chǎn)生白色稀疏菌絲的為煙草疫霉，產(chǎn)生灰色或淺黑色菌絲的為基生根串珠霉，產(chǎn)生黃白色菌膿的為青枯雷爾氏菌。

2.2還苗期伸根期黑脛病、青枯病的診斷和處置方法

不同的病原均會(huì)造成煙草幼苗根莖腐爛、整株死亡，而煙農(nóng)對(duì)于膜下小苗的感病癥狀普遍存在認(rèn)識(shí)誤區(qū)和診斷困難，建議從以下幾方面進(jìn)行排查和辨析。采用膜下小苗或膜下“井窖式”小苗移栽技術(shù)，發(fā)生病害的死苗率往往大于常規(guī)移栽的死苗率。在還苗期伸根期，幼苗與土壤表層接觸的莖基部出現(xiàn)暗褐色黑色病斑，病斑再擴(kuò)展環(huán)繞幼莖或底葉受到侵染沿葉柄擴(kuò)展到莖上，引起“猝倒”癥狀，黑脛病、青枯病侵染的概率比較大。由于癥狀不典型，采用傳統(tǒng)病害診斷難下結(jié)論，而移栽季節(jié)的限制又必需及時(shí)作出診斷結(jié)論，建議使用疫霉鞭毛、青枯菌一步法免疫膠體金快速診斷試劑盒，在田間地頭或檢查現(xiàn)場(chǎng)直接確診，以便采取相應(yīng)的預(yù)防補(bǔ)救措施。如果發(fā)病率不超過(guò)10%，不論是煙草黑脛病、還是青枯病，均需要在病株周圍土壤撒生石灰拌土，然后進(jìn)行補(bǔ)栽，在補(bǔ)栽當(dāng)日、補(bǔ)栽后10d、20d進(jìn)行化學(xué)防治；如果發(fā)病率超過(guò)10%，感染黑脛病的建議換栽抗性更強(qiáng)的品種，感染青枯病的建議改種其他作物，水旱輪作或與禾本科作物實(shí)行3年輪作后才可再次種植煙草。

2.3注意區(qū)分持續(xù)干旱與黑脛病造成的整株系統(tǒng)性凋萎

在云南煙區(qū)，煙草團(tuán)棵期往往遇上連續(xù)的干旱時(shí)期，導(dǎo)致煙株葉片系統(tǒng)性萎焉，形成日灼斑，即局部枯斑、枯焦；而煙草前期感染黑脛病后，也會(huì)整株系統(tǒng)性地表現(xiàn)葉片凋萎，形成局部枯斑、枯焦癥狀。這通常會(huì)引起煙農(nóng)的恐慌。持續(xù)干旱與黑脛病引起的系統(tǒng)性凋萎，可采用侵染性病害與非侵染性病害傳統(tǒng)診斷方法或補(bǔ)水治療診斷進(jìn)行區(qū)分。如果該癥狀在田間大面積同時(shí)發(fā)生、分布較均勻，且多在頂部心葉的外圍葉片和中、上部葉片的葉尖葉邊部分出現(xiàn)癥狀的，則是干旱造成的；在田間有明顯的發(fā)病中心、零散不均勻分布，中下部葉葉尖葉邊部分出現(xiàn)癥狀的，則是黑脛病。連續(xù)補(bǔ)水3～5d，萎蔫癥狀消失的，則是干旱造成的，萎蔫癥狀持續(xù)加重的，則是黑脛病。診斷為黑脛病的，在雨季來(lái)臨前，進(jìn)行化學(xué)藥劑防治，可以阻止病害的進(jìn)一步發(fā)展。診斷為干旱病因的，能灌溉的要及時(shí)補(bǔ)水，無(wú)灌溉條件的就等待雨季的來(lái)臨。

2.4切勿將“黑桿”癥狀稱為“黑桿病”

“黑桿病”是煙草感病后出現(xiàn)莖稈變黑癥狀的一個(gè)通俗說(shuō)法，但從技術(shù)角度分析則大為不妥，有失嚴(yán)謹(jǐn)。引起煙草黑桿癥狀的病害種類較多，煙草黑脛病、青枯病、空莖病（Tobaccohollowstalk）、馬鈴薯Y病毒病（PotatovirusY）、斑萎病（Tobaccospottedwilt）等均會(huì)導(dǎo)致煙莖變黑。如果是煙株葉片采烤完畢、僅剩煙稈，憑莖變黑的癥狀難以進(jìn)行病害診斷，此時(shí)應(yīng)當(dāng)通過(guò)現(xiàn)場(chǎng)踏查，進(jìn)行癥狀識(shí)別。一般來(lái)說(shuō)，田間零星發(fā)生的，縱剖病莖，髓部空心的是煙草空莖病；田間病害沿行向發(fā)展的，莖上病斑形成黑色條斑，縱剖病莖，髓部呈蜂窩狀軟腐、無(wú)碟片、可擠出菌膿，橫切病莖病側(cè)維管束呈黃褐色或黑褐色的是煙草青枯病；田間病害以同心圓發(fā)展的、莖上有圓形病斑的是煙草斑萎病；莖上有凹陷黑色塊狀病斑的是煙草馬鈴薯Y病毒病。此外，若病莖腐爛程度較重，可輔以一步法免疫膠體金快速診斷試劑盒進(jìn)行準(zhǔn)確診斷，或在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病原特異性PCR擴(kuò)增檢測(cè)。綜上所述，基層技術(shù)人員和煙農(nóng)在診斷煙草黑脛病時(shí)，應(yīng)注意與其他癥狀易混淆的侵染性病害或非侵染性病害進(jìn)行區(qū)別，養(yǎng)成在病害侵染前期系統(tǒng)觀察病癥的習(xí)慣，慎用“兩黑病”、“黑桿病”等模棱兩可的非專業(yè)術(shù)語(yǔ)。對(duì)于黑脛病及其近似病害的準(zhǔn)確診斷，仍有賴于DNA分子檢測(cè)或快速檢測(cè)試劑盒，但是，生產(chǎn)一線缺乏實(shí)驗(yàn)室設(shè)備，而一步法免疫膠體金快速診斷試劑盒目前主要靠進(jìn)口，其使用成本較高，大面積推廣應(yīng)用還不現(xiàn)實(shí)。建議進(jìn)一步研發(fā)廉價(jià)實(shí)用的國(guó)產(chǎn)化快速檢測(cè)試劑盒，或者是基于感病組織膜電位變化特征的田間植物病害診斷儀、便攜式DNA提取與PCR擴(kuò)增檢測(cè)一體儀，也可以應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)遠(yuǎn)程診斷等方式，幫助田間快速診斷。

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隨著煙葉生產(chǎn)中感病特色品種的持續(xù)種植，原有抗病品種抗性喪失，加之煙苗移栽苗齡小、抗病性弱，煙草黑脛病在局部地區(qū)嚴(yán)重發(fā)生，但其田間診斷技術(shù)難以適應(yīng)防控需求。本文辨析了煙草黑脛病、根黑腐病和青枯病的區(qū)別，提出了還苗期伸根期黑脛病與青枯病的診斷和處置方法，分析了整株系統(tǒng)性葉片局部枯斑枯焦的病因以及“黑桿”病癥剖析等實(shí)例，提出田間癥狀識(shí)別等傳統(tǒng)診斷技術(shù)與免疫學(xué)診斷技術(shù)、分子生物學(xué)診斷技術(shù)等專項(xiàng)檢測(cè)相結(jié)合，比對(duì)與排除獲得診斷結(jié)論是煙草黑脛病診斷的關(guān)鍵技術(shù)與方法。

關(guān)鍵詞：煙草黑脛病；根黑腐病；青枯病；診斷

煙草黑脛病（tobaccoblackshank）是由煙草疫霉（Phytophthoranicotianae）引起的，主要侵染煙草的根和莖基部，也可侵染葉片和幼苗，是煙草病害中僅次于病毒病的第二大類病害。煙草感染黑脛病后，往往會(huì)整株凋萎、死亡，對(duì)煙葉生產(chǎn)具毀滅性。盡管一些中抗品種的大面積推廣對(duì)抑制黑脛病發(fā)揮了重要作用，但部分煙草種植區(qū)持續(xù)種植感病的特色品種，原有抗病品種抗性逐漸喪失，加之煙苗移栽苗齡小、抗病性弱，導(dǎo)致黑脛病在局部暴發(fā)為害，對(duì)煙草生產(chǎn)造成嚴(yán)重威脅。病害的準(zhǔn)確診斷是實(shí)施有效防控的先決條件，為此，筆者結(jié)合多年田間實(shí)踐經(jīng)歷和病害診斷經(jīng)驗(yàn)，針對(duì)煙草黑脛病診斷中值得商榷的幾個(gè)問(wèn)題提出思考與建議。

1煙草黑脛病重發(fā)的原因

1）感病特色品種的持續(xù)種植。近年來(lái)，煙草品種特色化要求維持、加大一些地方特色品種的種植，而部分地方特色品種如云南的紅花大金元、福建的翠碧一號(hào)均為感黑脛病的品種。特色感病品種的大面積種植，累積加大了土壤煙草疫霉病原的基數(shù)，煙草黑脛病發(fā)病早、蔓延快、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)、為害嚴(yán)重、覆蓋范圍廣。2）原有抗病品種抗性喪失。隨著現(xiàn)代農(nóng)業(yè)栽培技術(shù)的發(fā)展，一些經(jīng)濟(jì)作物如花卉、蔬菜、水果的種植面積逐年增加，煙草作為比較經(jīng)濟(jì)效益低下的作物漸漸向丘陵與山區(qū)集中，有限的耕地制約了煙草的輪作與休耕，連作導(dǎo)致了廣泛種植的中抗品種（如云煙87）慢慢變?yōu)槟筒　⒏胁　?）煙苗移栽的苗齡小，抗病性弱。應(yīng)用膜下小苗或膜下“井窖式”小苗等技術(shù)，35～45d苗齡的移栽煙苗在膜下生長(zhǎng)。由于膜下土壤溫度提高，田間小環(huán)境濕度增大，導(dǎo)致煙株發(fā)病提前、發(fā)病快。4）田間病害診斷困難，延誤防治時(shí)期。煙草病害癥狀具有復(fù)雜性，一方面同一種病害表現(xiàn)出多種癥狀，如煙草黑脛病可以表現(xiàn)為根莖部黑脛、地上部莖葉“穿大褂”“腰爛”，葉部“黑膏藥”；另一方面多病原可以引起相同癥狀，如煙草莖“黑桿”癥狀。此外，煙草黑脛病典型癥狀出現(xiàn)存在明顯的滯后性，典型癥狀出現(xiàn)時(shí)已經(jīng)進(jìn)入病害的晚期，只能采取拔除煙株、藥劑消毒病灶、改種其他可以防病的作物等措施，以阻止病害的蔓延，但對(duì)煙草造成的損失已無(wú)可挽回。

2煙草黑脛病診斷中的問(wèn)題及其解決辦法

2.1明確區(qū)分煙草黑脛病、根黑腐病和青枯病

煙草“兩黑病”是煙草黑脛病、根黑腐病（Tobaccoblackrootrot）的一種籠統(tǒng)說(shuō)法，有時(shí)候還把青枯病引起的莖稈變黑混到了一起，這是對(duì)病害診斷和防治很不確切的提法。煙草黑脛病、根黑腐病和青枯病的病原有很大的區(qū)別。煙草黑脛病是煙草疫霉引起的，屬于卵菌病害；根黑腐病是由基生根串珠霉（Thielavioisbasicola）引起的，屬于真菌病害；而青枯病則是由青枯雷爾氏菌（Ralstoniasolanacea-rum）引起的，屬于細(xì)菌病害。筆者在多年的云南煙區(qū)田間病害調(diào)查中，極少發(fā)現(xiàn)煙草根黑腐病，這點(diǎn)也被2010—2014年開(kāi)展的煙草有害生物調(diào)查證實(shí)，即使在種植感病品種紅花大金元的區(qū)域進(jìn)行的聯(lián)合調(diào)查也極難發(fā)現(xiàn)煙草根黑腐病。也就是說(shuō)，煙草根黑腐病是偶發(fā)的次要病害，在田間零星發(fā)生，偶爾有成行的幾株呈現(xiàn)出發(fā)病中心的態(tài)勢(shì)，其為害可以忽略不計(jì)。煙草黑脛病則不同，在田間常年維持在1%左右的發(fā)病率，大面積踏查時(shí)，黑脛病引起的凋萎癥狀很易發(fā)現(xiàn)。總的來(lái)說(shuō)，通常所說(shuō)的“兩黑病”少90%以上的概率是發(fā)生了黑脛病。此外，要將近年來(lái)越來(lái)越嚴(yán)重的青枯病導(dǎo)致的莖稈發(fā)黑的現(xiàn)象，和黑脛病進(jìn)行區(qū)分。以上3種病害，在實(shí)驗(yàn)室可用特異性引物進(jìn)行單個(gè)或多重PCR擴(kuò)增檢測(cè)進(jìn)行區(qū)分，在田間調(diào)查中，可以根據(jù)侵染時(shí)期、為害特點(diǎn)和病征進(jìn)行區(qū)分。①侵染時(shí)期。煙草黑脛病在煙草整個(gè)生育期均可發(fā)生，在團(tuán)棵期和旺長(zhǎng)期有兩個(gè)明顯的發(fā)病高峰期。通常發(fā)生面廣，隨著時(shí)間推移，病害擴(kuò)散較快，能形成明顯的發(fā)病中心。煙草根黑腐病主要在苗床期、大田前期發(fā)生，多為局部或零星發(fā)病。煙草青枯病在整個(gè)大田期均可發(fā)生，病菌侵染集中在伸根期、中耕培土?xí)r，病害發(fā)展相對(duì)緩慢，發(fā)病高峰期表現(xiàn)在旺長(zhǎng)期、成熟期和采烤后，病害在田間呈條帶或條塊狀分布，且發(fā)生更為普遍、嚴(yán)重。②為害特點(diǎn)。煙草黑脛病主要通過(guò)根莖部侵染，病狀主要表現(xiàn)為根莖部變黑，縱向剖開(kāi)后可見(jiàn)莖髓部褐*片；在苗期或漂浮盤上的幼苗受黑脛病侵染會(huì)在3～5d的短期引起“猝倒”死亡的嚴(yán)重癥狀，而煙苗移栽大田成活后，若根部受到侵染，遇到連續(xù)干旱病害發(fā)展比較緩慢，少在20d后才可能在地上部表現(xiàn)凋萎、葉枯等明顯的癥狀，遇到雨季，約7d就可在地上部表現(xiàn)明顯的癥狀。煙草根黑腐病主要侵染根部，病狀表現(xiàn)為根腐爛變褐、變黑，有時(shí)會(huì)蔓延根莖部，縱向剖開(kāi)無(wú)褐*片，一般發(fā)病煙株矮化、輕度萎蔫，不會(huì)死亡。煙草青枯病主要通過(guò)根侵染，特別是新生側(cè)根、須根、不定根更容易受到侵染，病狀先表現(xiàn)在根上，當(dāng)根部受到侵染后，地上部分幾片葉萎蔫下垂，但葉片不變色，橫切病葉主脈，可發(fā)現(xiàn)呈黃褐色黑褐色的環(huán)狀維管束，挖出完整的根系，把泥土沖洗干凈，可發(fā)現(xiàn)少數(shù)根病變?yōu)楹稚⒑谏恢泻笃谇o上病斑沿莖的一側(cè)向上擴(kuò)展，在莖上形成條斑，病斑一側(cè)的葉片萎蔫，半邊枯萎，俗稱“半邊瘋”，縱剖病莖，髓部不變色、外圍呈蜂窩狀軟腐。發(fā)生根黑腐病、青枯病的煙株根部必然腐爛病變，發(fā)生根黑腐病的煙株整株根系少、在莖基部的四周產(chǎn)生數(shù)量較多的不定根，發(fā)生青枯病的煙株根系較完整、在根發(fā)病的一側(cè)產(chǎn)生較多的不定根，但發(fā)生黑脛病的根不一定腐爛。③病征。取新鮮的病組織進(jìn)行保濕培養(yǎng)，產(chǎn)生白色稀疏菌絲的為煙草疫霉，產(chǎn)生灰色或淺黑色菌絲的為基生根串珠霉，產(chǎn)生黃白色菌膿的為青枯雷爾氏菌。

2.2還苗期伸根期黑脛病、青枯病的診斷和處置方法

不同的病原均會(huì)造成煙草幼苗根莖腐爛、整株死亡，而煙農(nóng)對(duì)于膜下小苗的感病癥狀普遍存在認(rèn)識(shí)誤區(qū)和診斷困難，建議從以下幾方面進(jìn)行排查和辨析。采用膜下小苗或膜下“井窖式”小苗移栽技術(shù)，發(fā)生病害的死苗率往往大于常規(guī)移栽的死苗率。在還苗期伸根期，幼苗與土壤表層接觸的莖基部出現(xiàn)暗褐色黑色病斑，病斑再擴(kuò)展環(huán)繞幼莖或底葉受到侵染沿葉柄擴(kuò)展到莖上，引起“猝倒”癥狀，黑脛病、青枯病侵染的概率比較大。由于癥狀不典型，采用傳統(tǒng)病害診斷難下結(jié)論，而移栽季節(jié)的限制又必需及時(shí)作出診斷結(jié)論，建議使用疫霉鞭毛、青枯菌一步法免疫膠體金快速診斷試劑盒，在田間地頭或檢查現(xiàn)場(chǎng)直接確診，以便采取相應(yīng)的預(yù)防補(bǔ)救措施。如果發(fā)病率不超過(guò)10%，不論是煙草黑脛病、還是青枯病，均需要在病株周圍土壤撒生石灰拌土，然后進(jìn)行補(bǔ)栽，在補(bǔ)栽當(dāng)日、補(bǔ)栽后10d、20d進(jìn)行化學(xué)防治；如果發(fā)病率超過(guò)10%，感染黑脛病的建議換栽抗性更強(qiáng)的品種，感染青枯病的建議改種其他作物，水旱輪作或與禾本科作物實(shí)行3年輪作后才可再次種植煙草。

2.3注意區(qū)分持續(xù)干旱與黑脛病造成的整株系統(tǒng)性凋萎

在云南煙區(qū)，煙草團(tuán)棵期往往遇上連續(xù)的干旱時(shí)期，導(dǎo)致煙株葉片系統(tǒng)性萎焉，形成日灼斑，即局部枯斑、枯焦；而煙草前期感染黑脛病后，也會(huì)整株系統(tǒng)性地表現(xiàn)葉片凋萎，形成局部枯斑、枯焦癥狀。這通常會(huì)引起煙農(nóng)的恐慌。持續(xù)干旱與黑脛病引起的系統(tǒng)性凋萎，可采用侵染性病害與非侵染性病害傳統(tǒng)診斷方法或補(bǔ)水治療診斷進(jìn)行區(qū)分。如果該癥狀在田間大面積同時(shí)發(fā)生、分布較均勻，且多在頂部心葉的外圍葉片和中、上部葉片的葉尖葉邊部分出現(xiàn)癥狀的，則是干旱造成的；在田間有明顯的發(fā)病中心、零散不均勻分布，中下部葉葉尖葉邊部分出現(xiàn)癥狀的，則是黑脛病。連續(xù)補(bǔ)水3～5d，萎蔫癥狀消失的，則是干旱造成的，萎蔫癥狀持續(xù)加重的，則是黑脛病。診斷為黑脛病的，在雨季來(lái)臨前，進(jìn)行化學(xué)藥劑防治，可以阻止病害的進(jìn)一步發(fā)展。診斷為干旱病因的，能灌溉的要及時(shí)補(bǔ)水，無(wú)灌溉條件的就等待雨季的來(lái)臨。

2.4切勿將“黑桿”癥狀稱為“黑桿病”

“黑桿病”是煙草感病后出現(xiàn)莖稈變黑癥狀的一個(gè)通俗說(shuō)法，但從技術(shù)角度分析則大為不妥，有失嚴(yán)謹(jǐn)。引起煙草黑桿癥狀的病害種類較多，煙草黑脛病、青枯病、空莖病（Tobaccohollowstalk）、馬鈴薯Y病毒病（PotatovirusY）、斑萎病（Tobaccospottedwilt）等均會(huì)導(dǎo)致煙莖變黑。如果是煙株葉片采烤完畢、僅剩煙稈，憑莖變黑的癥狀難以進(jìn)行病害診斷，此時(shí)應(yīng)當(dāng)通過(guò)現(xiàn)場(chǎng)踏查，進(jìn)行癥狀識(shí)別。一般來(lái)說(shuō)，田間零星發(fā)生的，縱剖病莖，髓部空心的是煙草空莖病；田間病害沿行向發(fā)展的，莖上病斑形成黑色條斑，縱剖病莖，髓部呈蜂窩狀軟腐、無(wú)碟片、可擠出菌膿，橫切病莖病側(cè)維管束呈黃褐色或黑褐色的是煙草青枯病；田間病害以同心圓發(fā)展的、莖上有圓形病斑的是煙草斑萎病；莖上有凹陷黑色塊狀病斑的是煙草馬鈴薯Y病毒病。此外，若病莖腐爛程度較重，可輔以一步法免疫膠體金快速診斷試劑盒進(jìn)行準(zhǔn)確診斷，或在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病原特異性PCR擴(kuò)增檢測(cè)。綜上所述，基層技術(shù)人員和煙農(nóng)在診斷煙草黑脛病時(shí)，應(yīng)注意與其他癥狀易混淆的侵染性病害或非侵染性病害進(jìn)行區(qū)別，養(yǎng)成在病害侵染前期系統(tǒng)觀察病癥的習(xí)慣，慎用“兩黑病”、“黑桿病”等模棱兩可的非專業(yè)術(shù)語(yǔ)。對(duì)于黑脛病及其近似病害的準(zhǔn)確診斷，仍有賴于DNA分子檢測(cè)或快速檢測(cè)試劑盒，但是，生產(chǎn)一線缺乏實(shí)驗(yàn)室設(shè)備，而一步法免疫膠體金快速診斷試劑盒目前主要靠進(jìn)口，其使用成本較高，大面積推廣應(yīng)用還不現(xiàn)實(shí)。建議進(jìn)一步研發(fā)廉價(jià)實(shí)用的國(guó)產(chǎn)化快速檢測(cè)試劑盒，或者是基于感病組織膜電位變化特征的田間植物病害診斷儀、便攜式DNA提取與PCR擴(kuò)增檢測(cè)一體儀，也可以應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)遠(yuǎn)程診斷等方式，幫助田間快速診斷。

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隨著煙葉生產(chǎn)中感病特色品種的持續(xù)種植，原有抗病品種抗性喪失，加之煙苗移栽苗齡小、抗病性弱，煙草黑脛病在局部地區(qū)嚴(yán)重發(fā)生，但其田間診斷技術(shù)難以適應(yīng)防控需求。本文辨析了煙草黑脛病、根黑腐病和青枯病的區(qū)別，提出了還苗期伸根期黑脛病與青枯病的診斷和處置方法，分析了整株系統(tǒng)性葉片局部枯斑枯焦的病因以及“黑桿”病癥剖析等實(shí)例，提出田間癥狀識(shí)別等傳統(tǒng)診斷技術(shù)與免疫學(xué)診斷技術(shù)、分子生物學(xué)診斷技術(shù)等專項(xiàng)檢測(cè)相結(jié)合，比對(duì)與排除獲得診斷結(jié)論是煙草黑脛病診斷的關(guān)鍵技術(shù)與方法。

關(guān)鍵詞：煙草黑脛病；根黑腐病；青枯病；診斷

煙草黑脛病（tobaccoblackshank）是由煙草疫霉（Phytophthoranicotianae）引起的，主要侵染煙草的根和莖基部，也可侵染葉片和幼苗，是煙草病害中僅次于病毒病的第二大類病害。煙草感染黑脛病后，往往會(huì)整株凋萎、死亡，對(duì)煙葉生產(chǎn)具毀滅性。盡管一些中抗品種的大面積推廣對(duì)抑制黑脛病發(fā)揮了重要作用，但部分煙草種植區(qū)持續(xù)種植感病的特色品種，原有抗病品種抗性逐漸喪失，加之煙苗移栽苗齡小、抗病性弱，導(dǎo)致黑脛病在局部暴發(fā)為害，對(duì)煙草生產(chǎn)造成嚴(yán)重威脅。病害的準(zhǔn)確診斷是實(shí)施有效防控的先決條件，為此，筆者結(jié)合多年田間實(shí)踐經(jīng)歷和病害診斷經(jīng)驗(yàn)，針對(duì)煙草黑脛病診斷中值得商榷的幾個(gè)問(wèn)題提出思考與建議。

1煙草黑脛病重發(fā)的原因

1）感病特色品種的持續(xù)種植。近年來(lái)，煙草品種特色化要求維持、加大一些地方特色品種的種植，而部分地方特色品種如云南的紅花大金元、福建的翠碧一號(hào)均為感黑脛病的品種。特色感病品種的大面積種植，累積加大了土壤煙草疫霉病原的基數(shù)，煙草黑脛病發(fā)病早、蔓延快、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)、為害嚴(yán)重、覆蓋范圍廣。2）原有抗病品種抗性喪失。隨著現(xiàn)代農(nóng)業(yè)栽培技術(shù)的發(fā)展，一些經(jīng)濟(jì)作物如花卉、蔬菜、水果的種植面積逐年增加，煙草作為比較經(jīng)濟(jì)效益低下的作物漸漸向丘陵與山區(qū)集中，有限的耕地制約了煙草的輪作與休耕，連作導(dǎo)致了廣泛種植的中抗品種（如云煙87）慢慢變?yōu)槟筒　⒏胁　?）煙苗移栽的苗齡小，抗病性弱。應(yīng)用膜下小苗或膜下“井窖式”小苗等技術(shù)，35～45d苗齡的移栽煙苗在膜下生長(zhǎng)。由于膜下土壤溫度提高，田間小環(huán)境濕度增大，導(dǎo)致煙株發(fā)病提前、發(fā)病快。4）田間病害診斷困難，延誤防治時(shí)期。煙草病害癥狀具有復(fù)雜性，一方面同一種病害表現(xiàn)出多種癥狀，如煙草黑脛病可以表現(xiàn)為根莖部黑脛、地上部莖葉“穿大褂”“腰爛”，葉部“黑膏藥”；另一方面多病原可以引起相同癥狀，如煙草莖“黑桿”癥狀。此外，煙草黑脛病典型癥狀出現(xiàn)存在明顯的滯后性，典型癥狀出現(xiàn)時(shí)已經(jīng)進(jìn)入病害的晚期，只能采取拔除煙株、藥劑消毒病灶、改種其他可以防病的作物等措施，以阻止病害的蔓延，但對(duì)煙草造成的損失已無(wú)可挽回。

2煙草黑脛病診斷中的問(wèn)題及其解決辦法

2.1明確區(qū)分煙草黑脛病、根黑腐病和青枯病

煙草“兩黑病”是煙草黑脛病、根黑腐病（Tobaccoblackrootrot）的一種籠統(tǒng)說(shuō)法，有時(shí)候還把青枯病引起的莖稈變黑混到了一起，這是對(duì)病害診斷和防治很不確切的提法。煙草黑脛病、根黑腐病和青枯病的病原有很大的區(qū)別。煙草黑脛病是煙草疫霉引起的，屬于卵菌病害；根黑腐病是由基生根串珠霉（Thielavioisbasicola）引起的，屬于真菌病害；而青枯病則是由青枯雷爾氏菌（Ralstoniasolanacea-rum）引起的，屬于細(xì)菌病害。筆者在多年的云南煙區(qū)田間病害調(diào)查中，極少發(fā)現(xiàn)煙草根黑腐病，這點(diǎn)也被2010—2014年開(kāi)展的煙草有害生物調(diào)查證實(shí)，即使在種植感病品種紅花大金元的區(qū)域進(jìn)行的聯(lián)合調(diào)查也極難發(fā)現(xiàn)煙草根黑腐病。也就是說(shuō)，煙草根黑腐病是偶發(fā)的次要病害，在田間零星發(fā)生，偶爾有成行的幾株呈現(xiàn)出發(fā)病中心的態(tài)勢(shì)，其為害可以忽略不計(jì)。煙草黑脛病則不同，在田間常年維持在1%左右的發(fā)病率，大面積踏查時(shí)，黑脛病引起的凋萎癥狀很易發(fā)現(xiàn)。總的來(lái)說(shuō)，通常所說(shuō)的“兩黑病”少90%以上的概率是發(fā)生了黑脛病。此外，要將近年來(lái)越來(lái)越嚴(yán)重的青枯病導(dǎo)致的莖稈發(fā)黑的現(xiàn)象，和黑脛病進(jìn)行區(qū)分。以上3種病害，在實(shí)驗(yàn)室可用特異性引物進(jìn)行單個(gè)或多重PCR擴(kuò)增檢測(cè)進(jìn)行區(qū)分，在田間調(diào)查中，可以根據(jù)侵染時(shí)期、為害特點(diǎn)和病征進(jìn)行區(qū)分。①侵染時(shí)期。煙草黑脛病在煙草整個(gè)生育期均可發(fā)生，在團(tuán)棵期和旺長(zhǎng)期有兩個(gè)明顯的發(fā)病高峰期。通常發(fā)生面廣，隨著時(shí)間推移，病害擴(kuò)散較快，能形成明顯的發(fā)病中心。煙草根黑腐病主要在苗床期、大田前期發(fā)生，多為局部或零星發(fā)病。煙草青枯病在整個(gè)大田期均可發(fā)生，病菌侵染集中在伸根期、中耕培土?xí)r，病害發(fā)展相對(duì)緩慢，發(fā)病高峰期表現(xiàn)在旺長(zhǎng)期、成熟期和采烤后，病害在田間呈條帶或條塊狀分布，且發(fā)生更為普遍、嚴(yán)重。②為害特點(diǎn)。煙草黑脛病主要通過(guò)根莖部侵染，病狀主要表現(xiàn)為根莖部變黑，縱向剖開(kāi)后可見(jiàn)莖髓部褐*片；在苗期或漂浮盤上的幼苗受黑脛病侵染會(huì)在3～5d的短期引起“猝倒”死亡的嚴(yán)重癥狀，而煙苗移栽大田成活后，若根部受到侵染，遇到連續(xù)干旱病害發(fā)展比較緩慢，少在20d后才可能在地上部表現(xiàn)凋萎、葉枯等明顯的癥狀，遇到雨季，約7d就可在地上部表現(xiàn)明顯的癥狀。煙草根黑腐病主要侵染根部，病狀表現(xiàn)為根腐爛變褐、變黑，有時(shí)會(huì)蔓延根莖部，縱向剖開(kāi)無(wú)褐*片，一般發(fā)病煙株矮化、輕度萎蔫，不會(huì)死亡。煙草青枯病主要通過(guò)根侵染，特別是新生側(cè)根、須根、不定根更容易受到侵染，病狀先表現(xiàn)在根上，當(dāng)根部受到侵染后，地上部分幾片葉萎蔫下垂，但葉片不變色，橫切病葉主脈，可發(fā)現(xiàn)呈黃褐色黑褐色的環(huán)狀維管束，挖出完整的根系，把泥土沖洗干凈，可發(fā)現(xiàn)少數(shù)根病變?yōu)楹稚⒑谏恢泻笃谇o上病斑沿莖的一側(cè)向上擴(kuò)展，在莖上形成條斑，病斑一側(cè)的葉片萎蔫，半邊枯萎，俗稱“半邊瘋”，縱剖病莖，髓部不變色、外圍呈蜂窩狀軟腐。發(fā)生根黑腐病、青枯病的煙株根部必然腐爛病變，發(fā)生根黑腐病的煙株整株根系少、在莖基部的四周產(chǎn)生數(shù)量較多的不定根，發(fā)生青枯病的煙株根系較完整、在根發(fā)病的一側(cè)產(chǎn)生較多的不定根，但發(fā)生黑脛病的根不一定腐爛。③病征。取新鮮的病組織進(jìn)行保濕培養(yǎng)，產(chǎn)生白色稀疏菌絲的為煙草疫霉，產(chǎn)生灰色或淺黑色菌絲的為基生根串珠霉，產(chǎn)生黃白色菌膿的為青枯雷爾氏菌。

2.2還苗期伸根期黑脛病、青枯病的診斷和處置方法

不同的病原均會(huì)造成煙草幼苗根莖腐爛、整株死亡，而煙農(nóng)對(duì)于膜下小苗的感病癥狀普遍存在認(rèn)識(shí)誤區(qū)和診斷困難，建議從以下幾方面進(jìn)行排查和辨析。采用膜下小苗或膜下“井窖式”小苗移栽技術(shù)，發(fā)生病害的死苗率往往大于常規(guī)移栽的死苗率。在還苗期伸根期，幼苗與土壤表層接觸的莖基部出現(xiàn)暗褐色黑色病斑，病斑再擴(kuò)展環(huán)繞幼莖或底葉受到侵染沿葉柄擴(kuò)展到莖上，引起“猝倒”癥狀，黑脛病、青枯病侵染的概率比較大。由于癥狀不典型，采用傳統(tǒng)病害診斷難下結(jié)論，而移栽季節(jié)的限制又必需及時(shí)作出診斷結(jié)論，建議使用疫霉鞭毛、青枯菌一步法免疫膠體金快速診斷試劑盒，在田間地頭或檢查現(xiàn)場(chǎng)直接確診，以便采取相應(yīng)的預(yù)防補(bǔ)救措施。如果發(fā)病率不超過(guò)10%，不論是煙草黑脛病、還是青枯病，均需要在病株周圍土壤撒生石灰拌土，然后進(jìn)行補(bǔ)栽，在補(bǔ)栽當(dāng)日、補(bǔ)栽后10d、20d進(jìn)行化學(xué)防治；如果發(fā)病率超過(guò)10%，感染黑脛病的建議換栽抗性更強(qiáng)的品種，感染青枯病的建議改種其他作物，水旱輪作或與禾本科作物實(shí)行3年輪作后才可再次種植煙草。

2.3注意區(qū)分持續(xù)干旱與黑脛病造成的整株系統(tǒng)性凋萎

在云南煙區(qū)，煙草團(tuán)棵期往往遇上連續(xù)的干旱時(shí)期，導(dǎo)致煙株葉片系統(tǒng)性萎焉，形成日灼斑，即局部枯斑、枯焦；而煙草前期感染黑脛病后，也會(huì)整株系統(tǒng)性地表現(xiàn)葉片凋萎，形成局部枯斑、枯焦癥狀。這通常會(huì)引起煙農(nóng)的恐慌。持續(xù)干旱與黑脛病引起的系統(tǒng)性凋萎，可采用侵染性病害與非侵染性病害傳統(tǒng)診斷方法或補(bǔ)水治療診斷進(jìn)行區(qū)分。如果該癥狀在田間大面積同時(shí)發(fā)生、分布較均勻，且多在頂部心葉的外圍葉片和中、上部葉片的葉尖葉邊部分出現(xiàn)癥狀的，則是干旱造成的；在田間有明顯的發(fā)病中心、零散不均勻分布，中下部葉葉尖葉邊部分出現(xiàn)癥狀的，則是黑脛病。連續(xù)補(bǔ)水3～5d，萎蔫癥狀消失的，則是干旱造成的，萎蔫癥狀持續(xù)加重的，則是黑脛病。診斷為黑脛病的，在雨季來(lái)臨前，進(jìn)行化學(xué)藥劑防治，可以阻止病害的進(jìn)一步發(fā)展。診斷為干旱病因的，能灌溉的要及時(shí)補(bǔ)水，無(wú)灌溉條件的就等待雨季的來(lái)臨。

2.4切勿將“黑桿”癥狀稱為“黑桿病”

“黑桿病”是煙草感病后出現(xiàn)莖稈變黑癥狀的一個(gè)通俗說(shuō)法，但從技術(shù)角度分析則大為不妥，有失嚴(yán)謹(jǐn)。引起煙草黑桿癥狀的病害種類較多，煙草黑脛病、青枯病、空莖病（Tobaccohollowstalk）、馬鈴薯Y病毒病（PotatovirusY）、斑萎病（Tobaccospottedwilt）等均會(huì)導(dǎo)致煙莖變黑。如果是煙株葉片采烤完畢、僅剩煙稈，憑莖變黑的癥狀難以進(jìn)行病害診斷，此時(shí)應(yīng)當(dāng)通過(guò)現(xiàn)場(chǎng)踏查，進(jìn)行癥狀識(shí)別。一般來(lái)說(shuō)，田間零星發(fā)生的，縱剖病莖，髓部空心的是煙草空莖病；田間病害沿行向發(fā)展的，莖上病斑形成黑色條斑，縱剖病莖，髓部呈蜂窩狀軟腐、無(wú)碟片、可擠出菌膿，橫切病莖病側(cè)維管束呈黃褐色或黑褐色的是煙草青枯病；田間病害以同心圓發(fā)展的、莖上有圓形病斑的是煙草斑萎病；莖上有凹陷黑色塊狀病斑的是煙草馬鈴薯Y病毒病。此外，若病莖腐爛程度較重，可輔以一步法免疫膠體金快速診斷試劑盒進(jìn)行準(zhǔn)確診斷，或在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病原特異性PCR擴(kuò)增檢測(cè)。綜上所述，基層技術(shù)人員和煙農(nóng)在診斷煙草黑脛病時(shí)，應(yīng)注意與其他癥狀易混淆的侵染性病害或非侵染性病害進(jìn)行區(qū)別，養(yǎng)成在病害侵染前期系統(tǒng)觀察病癥的習(xí)慣，慎用“兩黑病”、“黑桿病”等模棱兩可的非專業(yè)術(shù)語(yǔ)。對(duì)于黑脛病及其近似病害的準(zhǔn)確診斷，仍有賴于DNA分子檢測(cè)或快速檢測(cè)試劑盒，但是，生產(chǎn)一線缺乏實(shí)驗(yàn)室設(shè)備，而一步法免疫膠體金快速診斷試劑盒目前主要靠進(jìn)口，其使用成本較高，大面積推廣應(yīng)用還不現(xiàn)實(shí)。建議進(jìn)一步研發(fā)廉價(jià)實(shí)用的國(guó)產(chǎn)化快速檢測(cè)試劑盒，或者是基于感病組織膜電位變化特征的田間植物病害診斷儀、便攜式DNA提取與PCR擴(kuò)增檢測(cè)一體儀，也可以應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)遠(yuǎn)程診斷等方式，幫助田間快速診斷。

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GHU  920T / 393R/ 1024 
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CHANNEL (SIGNAL0 2CHANNELS +0 (A&B) 
AMH9 16 5 SP G 13 B12 S6R 
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GHR920–393R-100 
GHT 508293R/1024 
9416/013 
GHR 920-396R / 500 
DHO5 08 PG29 1024 G3R 
DHM9 , Push-Pull, 1200 PULSE 
HS35F-62-R6-BS-2048-ABZC-28V / V-SM18-S 
SHU 920 – 1316 – 001 
DHM9 , Push-Pull, 5000 PULSE 
GHU920 293 9000 
GHU920.1024.019 

BEI編碼器GHM510296R/2048多數(shù)選擇

BEI編碼器GHM510296R/2048多數(shù)選擇

隨著煙葉生產(chǎn)中感病特色品種的持續(xù)種植，原有抗病品種抗性喪失，加之煙苗移栽苗齡小、抗病性弱，煙草黑脛病在局部地區(qū)嚴(yán)重發(fā)生，但其田間診斷技術(shù)難以適應(yīng)防控需求。本文辨析了煙草黑脛病、根黑腐病和青枯病的區(qū)別，提出了還苗期伸根期黑脛病與青枯病的診斷和處置方法，分析了整株系統(tǒng)性葉片局部枯斑枯焦的病因以及“黑桿”病癥剖析等實(shí)例，提出田間癥狀識(shí)別等傳統(tǒng)診斷技術(shù)與免疫學(xué)診斷技術(shù)、分子生物學(xué)診斷技術(shù)等專項(xiàng)檢測(cè)相結(jié)合，比對(duì)與排除獲得診斷結(jié)論是煙草黑脛病診斷的關(guān)鍵技術(shù)與方法。

關(guān)鍵詞：煙草黑脛病；根黑腐病；青枯病；診斷

煙草黑脛病（tobaccoblackshank）是由煙草疫霉（Phytophthoranicotianae）引起的，主要侵染煙草的根和莖基部，也可侵染葉片和幼苗，是煙草病害中僅次于病毒病的第二大類病害。煙草感染黑脛病后，往往會(huì)整株凋萎、死亡，對(duì)煙葉生產(chǎn)具毀滅性。盡管一些中抗品種的大面積推廣對(duì)抑制黑脛病發(fā)揮了重要作用，但部分煙草種植區(qū)持續(xù)種植感病的特色品種，原有抗病品種抗性逐漸喪失，加之煙苗移栽苗齡小、抗病性弱，導(dǎo)致黑脛病在局部暴發(fā)為害，對(duì)煙草生產(chǎn)造成嚴(yán)重威脅。病害的準(zhǔn)確診斷是實(shí)施有效防控的先決條件，為此，筆者結(jié)合多年田間實(shí)踐經(jīng)歷和病害診斷經(jīng)驗(yàn)，針對(duì)煙草黑脛病診斷中值得商榷的幾個(gè)問(wèn)題提出思考與建議。

1煙草黑脛病重發(fā)的原因

1）感病特色品種的持續(xù)種植。近年來(lái)，煙草品種特色化要求維持、加大一些地方特色品種的種植，而部分地方特色品種如云南的紅花大金元、福建的翠碧一號(hào)均為感黑脛病的品種。特色感病品種的大面積種植，累積加大了土壤煙草疫霉病原的基數(shù)，煙草黑脛病發(fā)病早、蔓延快、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)、為害嚴(yán)重、覆蓋范圍廣。2）原有抗病品種抗性喪失。隨著現(xiàn)代農(nóng)業(yè)栽培技術(shù)的發(fā)展，一些經(jīng)濟(jì)作物如花卉、蔬菜、水果的種植面積逐年增加，煙草作為比較經(jīng)濟(jì)效益低下的作物漸漸向丘陵與山區(qū)集中，有限的耕地制約了煙草的輪作與休耕，連作導(dǎo)致了廣泛種植的中抗品種（如云煙87）慢慢變?yōu)槟筒　⒏胁　?）煙苗移栽的苗齡小，抗病性弱。應(yīng)用膜下小苗或膜下“井窖式”小苗等技術(shù)，35～45d苗齡的移栽煙苗在膜下生長(zhǎng)。由于膜下土壤溫度提高，田間小環(huán)境濕度增大，導(dǎo)致煙株發(fā)病提前、發(fā)病快。4）田間病害診斷困難，延誤防治時(shí)期。煙草病害癥狀具有復(fù)雜性，一方面同一種病害表現(xiàn)出多種癥狀，如煙草黑脛病可以表現(xiàn)為根莖部黑脛、地上部莖葉“穿大褂”“腰爛”，葉部“黑膏藥”；另一方面多病原可以引起相同癥狀，如煙草莖“黑桿”癥狀。此外，煙草黑脛病典型癥狀出現(xiàn)存在明顯的滯后性，典型癥狀出現(xiàn)時(shí)已經(jīng)進(jìn)入病害的晚期，只能采取拔除煙株、藥劑消毒病灶、改種其他可以防病的作物等措施，以阻止病害的蔓延，但對(duì)煙草造成的損失已無(wú)可挽回。

2煙草黑脛病診斷中的問(wèn)題及其解決辦法

2.1明確區(qū)分煙草黑脛病、根黑腐病和青枯病

煙草“兩黑病”是煙草黑脛病、根黑腐病（Tobaccoblackrootrot）的一種籠統(tǒng)說(shuō)法，有時(shí)候還把青枯病引起的莖稈變黑混到了一起，這是對(duì)病害診斷和防治很不確切的提法。煙草黑脛病、根黑腐病和青枯病的病原有很大的區(qū)別。煙草黑脛病是煙草疫霉引起的，屬于卵菌病害；根黑腐病是由基生根串珠霉（Thielavioisbasicola）引起的，屬于真菌病害；而青枯病則是由青枯雷爾氏菌（Ralstoniasolanacea-rum）引起的，屬于細(xì)菌病害。筆者在多年的云南煙區(qū)田間病害調(diào)查中，極少發(fā)現(xiàn)煙草根黑腐病，這點(diǎn)也被2010—2014年開(kāi)展的煙草有害生物調(diào)查證實(shí)，即使在種植感病品種紅花大金元的區(qū)域進(jìn)行的聯(lián)合調(diào)查也極難發(fā)現(xiàn)煙草根黑腐病。也就是說(shuō)，煙草根黑腐病是偶發(fā)的次要病害，在田間零星發(fā)生，偶爾有成行的幾株呈現(xiàn)出發(fā)病中心的態(tài)勢(shì)，其為害可以忽略不計(jì)。煙草黑脛病則不同，在田間常年維持在1%左右的發(fā)病率，大面積踏查時(shí)，黑脛病引起的凋萎癥狀很易發(fā)現(xiàn)。總的來(lái)說(shuō)，通常所說(shuō)的“兩黑病”少90%以上的概率是發(fā)生了黑脛病。此外，要將近年來(lái)越來(lái)越嚴(yán)重的青枯病導(dǎo)致的莖稈發(fā)黑的現(xiàn)象，和黑脛病進(jìn)行區(qū)分。以上3種病害，在實(shí)驗(yàn)室可用特異性引物進(jìn)行單個(gè)或多重PCR擴(kuò)增檢測(cè)進(jìn)行區(qū)分，在田間調(diào)查中，可以根據(jù)侵染時(shí)期、為害特點(diǎn)和病征進(jìn)行區(qū)分。①侵染時(shí)期。煙草黑脛病在煙草整個(gè)生育期均可發(fā)生，在團(tuán)棵期和旺長(zhǎng)期有兩個(gè)明顯的發(fā)病高峰期。通常發(fā)生面廣，隨著時(shí)間推移，病害擴(kuò)散較快，能形成明顯的發(fā)病中心。煙草根黑腐病主要在苗床期、大田前期發(fā)生，多為局部或零星發(fā)病。煙草青枯病在整個(gè)大田期均可發(fā)生，病菌侵染集中在伸根期、中耕培土?xí)r，病害發(fā)展相對(duì)緩慢，發(fā)病高峰期表現(xiàn)在旺長(zhǎng)期、成熟期和采烤后，病害在田間呈條帶或條塊狀分布，且發(fā)生更為普遍、嚴(yán)重。②為害特點(diǎn)。煙草黑脛病主要通過(guò)根莖部侵染，病狀主要表現(xiàn)為根莖部變黑，縱向剖開(kāi)后可見(jiàn)莖髓部褐*片；在苗期或漂浮盤上的幼苗受黑脛病侵染會(huì)在3～5d的短期引起“猝倒”死亡的嚴(yán)重癥狀，而煙苗移栽大田成活后，若根部受到侵染，遇到連續(xù)干旱病害發(fā)展比較緩慢，少在20d后才可能在地上部表現(xiàn)凋萎、葉枯等明顯的癥狀，遇到雨季，約7d就可在地上部表現(xiàn)明顯的癥狀。煙草根黑腐病主要侵染根部，病狀表現(xiàn)為根腐爛變褐、變黑，有時(shí)會(huì)蔓延根莖部，縱向剖開(kāi)無(wú)褐*片，一般發(fā)病煙株矮化、輕度萎蔫，不會(huì)死亡。煙草青枯病主要通過(guò)根侵染，特別是新生側(cè)根、須根、不定根更容易受到侵染，病狀先表現(xiàn)在根上，當(dāng)根部受到侵染后，地上部分幾片葉萎蔫下垂，但葉片不變色，橫切病葉主脈，可發(fā)現(xiàn)呈黃褐色黑褐色的環(huán)狀維管束，挖出完整的根系，把泥土沖洗干凈，可發(fā)現(xiàn)少數(shù)根病變?yōu)楹稚⒑谏恢泻笃谇o上病斑沿莖的一側(cè)向上擴(kuò)展，在莖上形成條斑，病斑一側(cè)的葉片萎蔫，半邊枯萎，俗稱“半邊瘋”，縱剖病莖，髓部不變色、外圍呈蜂窩狀軟腐。發(fā)生根黑腐病、青枯病的煙株根部必然腐爛病變，發(fā)生根黑腐病的煙株整株根系少、在莖基部的四周產(chǎn)生數(shù)量較多的不定根，發(fā)生青枯病的煙株根系較完整、在根發(fā)病的一側(cè)產(chǎn)生較多的不定根，但發(fā)生黑脛病的根不一定腐爛。③病征。取新鮮的病組織進(jìn)行保濕培養(yǎng)，產(chǎn)生白色稀疏菌絲的為煙草疫霉，產(chǎn)生灰色或淺黑色菌絲的為基生根串珠霉，產(chǎn)生黃白色菌膿的為青枯雷爾氏菌。

2.2還苗期伸根期黑脛病、青枯病的診斷和處置方法

不同的病原均會(huì)造成煙草幼苗根莖腐爛、整株死亡，而煙農(nóng)對(duì)于膜下小苗的感病癥狀普遍存在認(rèn)識(shí)誤區(qū)和診斷困難，建議從以下幾方面進(jìn)行排查和辨析。采用膜下小苗或膜下“井窖式”小苗移栽技術(shù)，發(fā)生病害的死苗率往往大于常規(guī)移栽的死苗率。在還苗期伸根期，幼苗與土壤表層接觸的莖基部出現(xiàn)暗褐色黑色病斑，病斑再擴(kuò)展環(huán)繞幼莖或底葉受到侵染沿葉柄擴(kuò)展到莖上，引起“猝倒”癥狀，黑脛病、青枯病侵染的概率比較大。由于癥狀不典型，采用傳統(tǒng)病害診斷難下結(jié)論，而移栽季節(jié)的限制又必需及時(shí)作出診斷結(jié)論，建議使用疫霉鞭毛、青枯菌一步法免疫膠體金快速診斷試劑盒，在田間地頭或檢查現(xiàn)場(chǎng)直接確診，以便采取相應(yīng)的預(yù)防補(bǔ)救措施。如果發(fā)病率不超過(guò)10%，不論是煙草黑脛病、還是青枯病，均需要在病株周圍土壤撒生石灰拌土，然后進(jìn)行補(bǔ)栽，在補(bǔ)栽當(dāng)日、補(bǔ)栽后10d、20d進(jìn)行化學(xué)防治；如果發(fā)病率超過(guò)10%，感染黑脛病的建議換栽抗性更強(qiáng)的品種，感染青枯病的建議改種其他作物，水旱輪作或與禾本科作物實(shí)行3年輪作后才可再次種植煙草。

2.3注意區(qū)分持續(xù)干旱與黑脛病造成的整株系統(tǒng)性凋萎

在云南煙區(qū)，煙草團(tuán)棵期往往遇上連續(xù)的干旱時(shí)期，導(dǎo)致煙株葉片系統(tǒng)性萎焉，形成日灼斑，即局部枯斑、枯焦；而煙草前期感染黑脛病后，也會(huì)整株系統(tǒng)性地表現(xiàn)葉片凋萎，形成局部枯斑、枯焦癥狀。這通常會(huì)引起煙農(nóng)的恐慌。持續(xù)干旱與黑脛病引起的系統(tǒng)性凋萎，可采用侵染性病害與非侵染性病害傳統(tǒng)診斷方法或補(bǔ)水治療診斷進(jìn)行區(qū)分。如果該癥狀在田間大面積同時(shí)發(fā)生、分布較均勻，且多在頂部心葉的外圍葉片和中、上部葉片的葉尖葉邊部分出現(xiàn)癥狀的，則是干旱造成的；在田間有明顯的發(fā)病中心、零散不均勻分布，中下部葉葉尖葉邊部分出現(xiàn)癥狀的，則是黑脛病。連續(xù)補(bǔ)水3～5d，萎蔫癥狀消失的，則是干旱造成的，萎蔫癥狀持續(xù)加重的，則是黑脛病。診斷為黑脛病的，在雨季來(lái)臨前，進(jìn)行化學(xué)藥劑防治，可以阻止病害的進(jìn)一步發(fā)展。診斷為干旱病因的，能灌溉的要及時(shí)補(bǔ)水，無(wú)灌溉條件的就等待雨季的來(lái)臨。

2.4切勿將“黑桿”癥狀稱為“黑桿病”

“黑桿病”是煙草感病后出現(xiàn)莖稈變黑癥狀的一個(gè)通俗說(shuō)法，但從技術(shù)角度分析則大為不妥，有失嚴(yán)謹(jǐn)。引起煙草黑桿癥狀的病害種類較多，煙草黑脛病、青枯病、空莖病（Tobaccohollowstalk）、馬鈴薯Y病毒病（PotatovirusY）、斑萎病（Tobaccospottedwilt）等均會(huì)導(dǎo)致煙莖變黑。如果是煙株葉片采烤完畢、僅剩煙稈，憑莖變黑的癥狀難以進(jìn)行病害診斷，此時(shí)應(yīng)當(dāng)通過(guò)現(xiàn)場(chǎng)踏查，進(jìn)行癥狀識(shí)別。一般來(lái)說(shuō)，田間零星發(fā)生的，縱剖病莖，髓部空心的是煙草空莖病；田間病害沿行向發(fā)展的，莖上病斑形成黑色條斑，縱剖病莖，髓部呈蜂窩狀軟腐、無(wú)碟片、可擠出菌膿，橫切病莖病側(cè)維管束呈黃褐色或黑褐色的是煙草青枯病；田間病害以同心圓發(fā)展的、莖上有圓形病斑的是煙草斑萎病；莖上有凹陷黑色塊狀病斑的是煙草馬鈴薯Y病毒病。此外，若病莖腐爛程度較重，可輔以一步法免疫膠體金快速診斷試劑盒進(jìn)行準(zhǔn)確診斷，或在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病原特異性PCR擴(kuò)增檢測(cè)。綜上所述，基層技術(shù)人員和煙農(nóng)在診斷煙草黑脛病時(shí)，應(yīng)注意與其他癥狀易混淆的侵染性病害或非侵染性病害進(jìn)行區(qū)別，養(yǎng)成在病害侵染前期系統(tǒng)觀察病癥的習(xí)慣，慎用“兩黑病”、“黑桿病”等模棱兩可的非專業(yè)術(shù)語(yǔ)。對(duì)于黑脛病及其近似病害的準(zhǔn)確診斷，仍有賴于DNA分子檢測(cè)或快速檢測(cè)試劑盒，但是，生產(chǎn)一線缺乏實(shí)驗(yàn)室設(shè)備，而一步法免疫膠體金快速診斷試劑盒目前主要靠進(jìn)口，其使用成本較高，大面積推廣應(yīng)用還不現(xiàn)實(shí)。建議進(jìn)一步研發(fā)廉價(jià)實(shí)用的國(guó)產(chǎn)化快速檢測(cè)試劑盒，或者是基于感病組織膜電位變化特征的田間植物病害診斷儀、便攜式DNA提取與PCR擴(kuò)增檢測(cè)一體儀，也可以應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)遠(yuǎn)程診斷等方式，幫助田間快速診斷。